Главная » 2014 » Сентябрь » 21 » Скачать Бактериофаги и пектины в коррекции нарушений микробиоценозов при гнойно-воспалительных процессах. Лазарева, Елена Борисовна бесплатно
0:05 AM
Скачать Бактериофаги и пектины в коррекции нарушений микробиоценозов при гнойно-воспалительных процессах. Лазарева, Елена Борисовна бесплатно
Бактериофаги и пектины в коррекции нарушений микробиоценозов при гнойно-воспалительных процессах
Диссертация
Автор: Лазарева, Елена Борисовна
Название: Бактериофаги и пектины в коррекции нарушений микробиоценозов при гнойно-воспалительных процессах
Справка: Лазарева, Елена Борисовна. Бактериофаги и пектины в коррекции нарушений микробиоценозов при гнойно-воспалительных процессах : диссертация доктора биологических наук : 03.00.07 / Лазарева Елена Борисовна; [Место защиты: ФГУН "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии"] - Москва, 2007 - Количество страниц: 179 с. 21 ил. Москва, 2007 200 c. :
Объем: 200 стр.
Информация: Москва, 2007
Содержание:
Список сокращений
Введение
Глава 1 Значение бактериофагов и пектинов в медицинской практике
Обзор литературы
11 Бактериофаги для лечения и профилактики инфекционных заболеваний
12 Опыт и перспективы использования пектинов в лечебной практике
Глава 2 Материалы и методы исследований
21 Материал клинического исследования
211 Ведущие возбудители гнойно-воспалительных процессов
212 Общая характеристика больных, получавших лечение бактериофагами и пектинами
2121 Пероральное применение бактериофагов
2122 Местное применение бактериофагов
2123 Изучение фагокинетики
2124 Пероральное применение пектинов у больных с термическими ожогами
2125 Местное применение пектинов у больных с термическими ожогами
2126 Пероральное применение пектинов у больных с черепно-мозговой травмой
2127 Пероральное применение пектинов у больных с перитонитом
2128 Местное (интравагинальное) использование пектинов у больных с бактериальным вагинозом
213 Экспериментальное изучение пектинов in vitro
22 Методы исследования
221 Бактериологическое обследование больных
222 Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам
223 Выявление фага в биологических жидкостях методом агаровых слоев
224 Иммунологические методы исследования
225 Клинико-биохимические методы исследования
226 Цитологические методы исследования
227 Изучение биологических свойств пектинов
2271 Методы определения антибактериальных и сорбционных свойств пектинов
2272 Изучение влияния пектинов на антибиотики, пенициллиназу и бактериофаги
2273 Определение антиоксидантных свойств пектинов
228 Статистические методы исследования
Глава 3 Мониторинг возбудителен гнойпо-воспалнтельных процессов
31 Ведущие возбудители гнойно-воспалительных процессов
32 Лекарственная чувствительность возбудителей ГВП у больных с неотложной хирургической патологией
Глава 4 Антимикробная активность пектинов и взаимодействие с бактериофагами и антибиотиками in vitro
41 Изучение влияния пектинов на микроорганизмы in vitro
42 Изучение влияния различных факторов на бактерицидное действие пектинов in vitro
43 Действие пектинов на бактериофаги, антибиотики и пенициллиназу
Глава 5 Клинико-лабораторнап оценка эффективности применения лечебных бактериофагов в комплексном лечении больных с неотложной хирургической патологией
51 Пероральное применение бактериофагов у больных с ожоговой травмой
52 Местное применение бактериофагов
53 Изучение фагокинетики и клиренса бактериофагов
Глава 6 Клинико-лабораторнаи оценка эффективности применения некти нов в комплексном лечении больных с неотложной хирургической патологией
61 Пероральное применение пектинов для профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов у ожоговых больных
62 Применение пектинов в комплексе лечебных мероприятий у нейрореанимационных больных
63 Применение пектинов и глутамина в комплексном лечении больных с перитонитом
64 Эффективность местного применения пектинов в лечении ожоговых ран
65 Местное лечение бактериальных вагинозов, осложненных воспалительными заболеваниями малого таза, с помощью пектинов
Введение:
Проблема профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов (ГВП) в хирургии по-прежнему актуальна. По литературным данным, частота ГВП в отделении реанимации и интенсивной терапии составляет 18,9%, а летальность среди них достигает 53,6% [265]. В 18,2% случаев ГВП в хирургии осложняются сепсисом. Наиболее часто он диагностируется у больных с медиастинитом (82%) и распространенным гнойным перитонитом (78,3%), при этом летальность составляет 43-82% [278]. В общей структуре послеоперационных осложнений в раннем послеоперационном периоде при операциях резекции трахеи, трахеопластики, эндопротезирования трахеи ГВП составляют 64,4%. За последние 10 лет, несмотря на применение новых антибиотиков бета-лактамной группы (имипенем, меропенем) и препаратов метронидазола, летальность при гнойном медиастините повысилась почти вдвое и составила 18,7% [65, 144]. Летальность при перитоните колеблется от 16% до 80% [70, 87, 302]. Интенсивное применение антибактериальных препаратов, в ряде случаев необоснованное, приводит к изменению видового состава возбудителей, появлению полирезистентных штаммов микроорганизмов и генерализации инфекции с развитием сепсиса [33, 61, 236, 270, 275, 291]. За последние 50 лет частота хирургического сепсиса возросла в 10 раз, летальность от тяжелого сепсиса и септического шока в течение 80 лет не изменилась и составляет 50-80%. На лечение одного такого больного тратится до 300000 долларов [72, 88, 178, 277]. В структуре летальности обожженных увеличивается доля инфекционных осложнений [103]. При этом отмечается тенденция к росту частоты сепсиса, летальность от которого достигает 70% [39, 271, 286]. При черепно-мозговой травме за последние годы частота развития ГВП возрастает и встречается у 5-7% пострадавших. Развитие менингитов достигает 10%, а при открытых и проникающих повреждениях черепа - 20-29% [105, 110, 111].
Для борьбы с гнойно-воспалительными заболеваниями и осложнениями разрабатываются новые виды и классы антибиотиков [201, 254, 314]. Однако это не спасает положение, потому что и к ним быстро развивается устойчивость. В этой связи многие исследователи говорят о серьезном "кризисе антибактериальной терапии" [77,235,236,311].
Это заставляет искать новые подходы к профилактике и лечению ГВП, использовать про- и пребиотики в качестве сорбентов и антагонистов патогеннной и условно-патогенной микрофлоры, обладающих иммуномодулирующим и противовоспалительным действием [34, 216, 217]. Как в нашей стране, так и за рубежом вновь появился интерес к лечебным бактериофагам. В настоящее время отмечен успешный опыт применения лечебных бактериофагов в хирургии, онкологии, урологии, гинекологии, офтальмологии и т.д. [5, 17, 138, 148, 197, 203, 229, 230]. Отмечены положительные качества бактериофагов: отсутствие токсического действия на организм, развития аллергических реакции, дисбакгериозов. Затраты на создание новых бактериофагов значительно меньше, чем на разработку антибиотиков. Применение фагов не исключает использование других лекарственных препаратов. Противопоказания к применению бактериофагов не установлены [67, 181]. Однако эффективность лечебных фагов в неотложной хирургии изучена недостаточно.
Другим направлением в лечении ГВП является использование пищевых волокон, в том числе пектинов, обладающих бактерицидным, сорбционным, иммуномодулирующим, стимулирующим моторику кишечника и репаративным действием [76, 157, 193, 218]. Поэтому ранее их успешно применяли для лечения острых кишечных инфекций, дисбактериозов, в качестве сорбентов при рентгеновском облучении и отравлении солями тяжелых металлов. Разработаны препараты для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также гастритов [127]. В последние годы пектины стали применять в комплексе лечебных мероприятий при перитоните [20, 36, 63, 118, 220, 225]. При других видах хирургической патологии, в частности при ожоговой и черепно-мозговой травме их не использовали ни перорально, ни местно.
Цель работы - этиопатогецетическое обоснование повышения эффективности профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов с помощью бактериофагов и пектинов.
Задачи работы.
1. Провести исследование у больных с неотложной хирургической патологией видового состава возбудителей ГВП и определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам.
2. Изучить in vitro влияние пектинов и возможные механизмы их действия на микроорганизмы и характер взаимодействия пектинов с бактериофагами и антибиотиками.
3. Выявить особенности кинетики лечебных бактериофагов и их клиренса при пероралыюм приеме препарата.
4. Оценить эффективность перорального использования пектинов и бактериофагов для профилактики и лечения ГВП у больных с неотложной хирургической патологией на основании клинических данных, иммунологических, биохимических показателей и информации о микрофлоре биотопов организма.
5. Обосновать целесообразность местного лечения бактериофагами и пектинами ран у больных с ожоговой травмой.
6. Изучить возможность лечения бактериальных вагинозов пектинами в гинекологический практике.
Научная новизна.
В эксперименте in vitro установлено, что пектины и бактериофаги оказывают бактерицидное действие на широкий спектр возбудителей ГВП и не влияют на представителей нормофлоры желудочно-кишечного тракта - бифидобактерии и лактобактерии, а также дрожжеподобные грибы даже в 4% концентрации.
На основании впервые проведенного исследования взаимодействия пектинов и бактериофагов показано, что в высокой концентрации пектины подавляют логическую активность бактериофагов, снижают активность антибиотиков группы пенициллинов, не сорбируют и не снижают активность антибиотиков других групп, а также не разрушают пенициллиназу.
В результате изучения фагокинетики лечебных бактериофагов у больных с термическими поражениями и черепно-мозговой травмой установлена зависимость клиренса от присутствия в макроорганизме гомологичных и чувствительных к фагам возбудителей ГВП.
Впервые выявлена антиоксидантная активность (АОА) in vitro некоторых видов пектинов и определена положительная связь между величиной АОА с их антибактериальной активностью. Разработан способ оценки антибактериальных свойств пектинов на основе определения величины АОА хемилюминисцентным методом (патент на изобретение №. 2298170 от 27 апреля 2007 г.). Предложено использовать пектины как средство повышения АОА сыворотки крови больных (патент на изобретение №.2272633 от 27 марта 2006 г.).
Разработано новое направление в профилактике и лечении ГВП при пероральном и местным использовании пектинов с учетом их взаимодействия с антибиотиками, бактериофагами и нормофлорой биотопов организма человека.
Установлено, что использование бактериофагов и пектинов способствует снижению микробной обсемененности различных биотопов, нормализации нарушенных микробиоценозов, уменьшению интоксикации, повышению различных звеньев иммунитета.
Показана эффективность лечения пектинами бактериальных вагинозов.
Практическая значимость.
Работа выполнена в рамках научной программы института "Совершенствование методов диагностики и лечения неотложных состояний" № 070.09.
Результаты изучения свойств пектинов и бактериофагов позволили определить их место в комплексной терапии и дать рекомендации по использованию для профилактики и лечения ГВП. Определены сроки назначения бактериофагов и пектинов.
На основании клинико-лабораториых данных установлена целесообразность комплексного применения пектинов, антибиотиков различных групп и бактериофагов. Разработаны рекомендации по возможности коррекции дисбиотических нарушений микробиоценоза кишечника, а также по использованию пектинов для местного лечения ожоговых ран и в гинекологической практике при лечении бактериальных вагинозов.
В результате изучения АОА разных пектинов обнаружена связь между величиной АОА и антибактериальной активностью. Разработан экспресс-метод оценки антибактериальных свойств пектинов путем определения их АОА хемилюминисцентным методом. Предложен способ повышения АОА сыворотки крови с помощью пектинов на примере больных с ожоговой травмой.
Личный вклад автора.
Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления и выполнения основного объема исследований. Все микробиологические исследования и координация работы всех участвовавших подразделений выполнены лично автором. Автор принимала непосредственное участие в обработке материала, написании статей, отчетов, докладов и методических рекомендаций. Работы и изобретения, выполненные в соавторстве, имели ссылки с указанием учреждений, где были проведены исследования и фамилии соавторов. Автором осуществлено внедрение результатов исследования в практику.
Апробация работы.
Основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Дисбактериозы и эубиотики» (1996), I Российском конгрессе «Парентеральное и энтеральное питание в гастроэнтерологии» (1997), на VII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И.И Мечникова (1997), на II Конгрессе ассоциации хирургов им. Н.И.Пирогова, СПб (1998), на V Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (1998), на городской научно-практической конференции «Острые сдавления головного мозга» (1998), на симпозиуме «Клиническая лаборатория на пороге XXI века» (1999), на II Российской научно-практической конференции «Внутрибольничные инфекции -проблемы эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики» (1999), на эндоскопическом обществе (2001), на Международной научно-практической конференции «Пробиотичеекие микроорганизмы: современное состояние вопроса и перспективы использования» (2002), на II Региональной научно-практической конференции «Искусственное питание и инфузионная терапия больных в медицине критических состояний» (2002), на конференции «Современные проблемы антимикробной терапии» (2003), на научно-практической конференции «Внедрение новых технологий по профилактике и лечению внутрибольничных инфекций в лечебно-профилактических учреждениях различного профиля» (2004); на IV научно-практической конференции «Внутриболышчные инфекции в стационарах различного профиля, профилактика, лечение осложнений» (2006), на международной конференции «Актуальные проблемы термической травмы» (2006), на V научно-практической конференции «Внутриболышчные инфекции в стационарах различного профиля, профилактика, лечение осложнений» (2007).
Положении, выносимые на защиту.
1. Применение лечебных бактериофагов и пектинов в комплексе мероприятий, направленных на лечение и профилактику ГВП у пациентов с неотложной хирургической патологией, целесообразно и является эффективным, что подтверждено данными микробиологического мониторинга и другими клинико-лабораторными исследованиями, снижением под их воздействием количества инфекционных осложнений и летальности.
2. Кинетика и клиренс лечебных бактериофагов в организме больных зависят от присутствия чувствительных к фагам гомологичных возбудителей ГВП. Через 1 час после однократного перорального приема бактериофагов они появляются в крови и других биологических средах макроорганизма и присутствуют в них до 7 и более суток.
3. Эффективность бактериофагов и пектинов in vitro и in vivo определяется бактерицидным действием на условно-патогенные микроорганизмы, коррекцией нарушенных микробиоценозов, повышением антиоксидантпой активности сыворотки крови, противовоспалительным и репаративным действием, а также нормализацией иммунологических показателей больных.
Внедрение результатов работы в практику.
Основные положения диссертации используются в практической работе НИИ СП им. Н.В. Склифосовского и городской поликлиники № 66. Результаты диссертационной работы внедрены в педагогическую практику кафедры микробиологии Российской медицинской академии последипломного образования.
По материалам диссертации выпущены методические рекомендации "Пектины в комплексной терапии больных с неотложной хирургической патологией".
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 59 печатных работ, из которых 17 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК, 1 методические рекомендации и 2 патента.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 200 страницах машинописного текста. Состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, содержащего 232 отечественных и 83 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 30 таблицами и 31 рисунком.
