Главная » 2014 » Август » 27 » Скачать Изменения физико-химических свойств лимфоцитов в процессах развития индуцированного канцерогенеза и общей реакции на повреждение. бесплатно
1:17 AM
Скачать Изменения физико-химических свойств лимфоцитов в процессах развития индуцированного канцерогенеза и общей реакции на повреждение. бесплатно
Изменения физико-химических свойств лимфоцитов в процессах развития индуцированного канцерогенеза и общей реакции на повреждение
Диссертация
Автор: Тарасова, Ирина Михайловна
Название: Изменения физико-химических свойств лимфоцитов в процессах развития индуцированного канцерогенеза и общей реакции на повреждение
Справка: Тарасова, Ирина Михайловна. Изменения физико-химических свойств лимфоцитов в процессах развития индуцированного канцерогенеза и общей реакции на повреждение : диссертация кандидата физико-математических наук : 03.00.02 Москва, 1985 187 c. : 61 85-1/2302
Объем: 187 стр.
Информация: Москва, 1985
Содержание:
Список сокращений
Глава 1 Обзор литературы
11 Синтез альбумина, распределение в организме, утилизация
12 Строение молекулы альбумина
13 Функции альбумина
14 Гетерогенность альбумина
15 Современное состояние методических подходов к выделению альбумина
16 Методы исследования связывающей способности альбумина
17 Изучение физико-химических и сорбционных свойств альбумина при заболеваниях почек
Глава 2 Материалы и методы
21 Характеристика обследованных доноров и больных с заболеваниями почек
22 Методы
23 Основное оборудование
24 Методы статистической обработки материалов исследования
Глава 3 Результаты исследований
31 Подбор оптимальной концентрации сульфата аммония для выделении альбумина из цельной сыворотки крови с помощью метода высаливания
32 Результаты опытов по выделению ал ьбумина из образцов сыворотки крови доноров и больных хроническим гломерулонефритом
33 Сравнение двух методов выделения альбумина из сыворотки крови с помощью высаливания и с помощью полиэтиленгликоля
34 Содержание сульфгидрильных групп в сыворотке крови и во фракции, полученной после частичного выделения альбумина сыворотки крови методом высаливания
35 Содержание жирных кислот в сыворотке крови и во фракции, полученной после высаливания
36 Фракции нативного и модифицированного альбумина сыворотки крови и фракции частично очищенного альбумина доноров и больных хроническим гломерулонефритом
37 Альбумин и модифицированный альбумин в моче больных хроническим гломерулонефритом в стадии обострения
38 Характеристика связывающей способности альбумина сыворотки крови доноров и больных с помощью флуоресцентного зонда К-
Глава 4 Обсуждение результатов
41 Свойства альбумина сыворотки крови доноров
42 Свойства альбумина сыворотки крови больных, получавших консервативную терапию
43 Свойства альбумина сыворотки крови больных, получавших лечение регулярным гемодиализом
Выводы
Введение:
Актуальность проблемы. Альбумин является основным белком плазмы крови и выполняет разнообразные функции, такие, как поддержание онкотического давления крови, антиоксидантная, транспортная. Альбумин способен сорбировать широкий круг веществ как эндогенного, так и экзогенного происхождения [Peters Т.Jr., 1985].Определение концентрации альбумина в сыворотке крови является важным клинико-лабораторным показателем. Однако нормальное содержание альбумина еще не означает его функциональной полноценности. Уже несколько десятилетий назад было замечено, что при некоторых заболеваниях сорбционные и другие физико-химические свойства альбумина изменяются - происходит нарушение нативной конформации молекулы, снижается отрицательный электрический заряд. Такой альбумин был назван модифицированным [Троицкий Г.В. и др., 1974].Исследование состояния альбумина при различных патологических процессах за последние годы получило широкое распространение. Однако данных, касающихся свойств сывороточного альбумина при заболеваниях почек, в литературе описано относительно мало. Считается, что основными причинами протеинурии при заболеваниях почек являются нарушения структуры гломерулярного фильтра - увеличение порозности мембраны с одновременным снижением содержания клубочкового полианионного комплекса [Плоткин В.Я., 1992; Klahr S., 1987]. Однако в последнее в р е м я высказываются предположения, что изменения конформационных и сорбционных свойств самого альбумина могут способствовать развитию протеинурии [Кожевников А.Д., 1997]. Кроме того, недавно появились предположения о прямом повреждающем воздействии модифицированного альбумина на клетки почечных канальцев у больных с хроническим гломерулонефритом (ХГН), особенно при развитии нефротического синдрома (НС) [Ruggenenti Р. , Remuzzi G., 2000; Schreiner G.F., 1995].Таким образом, изучение свойств альбумина и его функциональной полноценности при ХГН является актуальным.Цель исследования: Изучение сорбционных и других физикохимических свойств альбумина и выявление его модифицированных форм в сыворотке крови и моче больных хроническим гломерулонефритом.Задачи исследования 1. Подобрать оптимальные условия для выделения альбумина сыворотки крови доноров и больных с ХГН с помощью метода высаливания.2. Сравнить результаты выделения альбумина из сыворотки крови методом высаливания с методом частичной очистки альбумина с использованием полиэтиленгликоля.3. Изучить устойчивость в солевых растворах альбумина сыворотки крови доноров и больных с ХГН при различных клинических вариантах течения заболевания, а также при использовании консервативных и активных (гемодиализ) методов лечения.4. Оценить содержание сульфгидрильных групп в сыворотке и во фракции после высаливания у доноров и больных с ХГН, как показателя целостности нативной конформации молекулы альбумина.5. Дать количественную оценку содержания неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке крови и во фракции после высаливания в расчете на молекулу альбумина, как показателя, характеризующего транспортную функцию альбумина.6. Оценить соотношение фракций нативного и модифицированного альбумина в сыворотке крови и в моче обследованных лиц.7. Изучить возможность использования флуориметрического метода с применением зонда К-35 для оценки суммарного содержания альбумина в сыворотке крови и его связывающей способности.Научная новизна и теоретическая значимость исследования Сформулировано новое представление о состоянии альбумина при ХГН. Проведенные исследования выявили значительные изменения сорбционных и других физикохимических свойств альбумина сыворотки крови больных с ХГН. Получены новые данные о снижении растворимости альбумина в солевых растворах, которые свидетельствуют об уменьшении суммарного отрицательного электрического заряда и размеров гидратной оболочки белковой молекулы у больных при ХГН, что может играть существенную роль в развитии протеинурии.Сформулировано представление о том, что высокое относительное содержание модифицированного альбумина в моче представляет собой один из механизмов элиминации альбумина с измененными нативными свойствами и выполняет, таким образом, гоме о статическую функцию.Свойства альбумина у больных с хронической почечной недостаточностью (ХГШ), находящихся на регулярном гемодиализе, отличаются от таковых у больных в доазотемическом периоде заболевания и состоят в снижении сорбционной ёмкости за счет перегруженности эндотоксинами.Установлено, что в крови больных с НС ф и з и к о химические свойства альбумина претерпевают глубокие изменения, связанные со снижением растворимости и нарушением конформации вплоть до разворачивания белковой глобулы. Преобразованный таким образом альбумин легче проникает через почечный фильтр, усугубляя патологический процесс.Практическая значимость Разработан и внедрен в нефрологическую практику способ определения модифицированного альбумина в моче больных с ХГН. Установлено, что уровень модифицированного альбумина в моче больных резко увеличивается по мере нарастания протеинурии, что свидетельствует об участии нарушений физикохимических свойств альбумина в патогенезе развития нефротического синдрома.Доказано, что у больных с ХПН, находящихся на гемодиализной терапии, молекулы альбумина перегружены уремическими токсинами, что снижает сорбционную ёмкость альбумина и его антитоксические свойства.Флуоресцентный метод определения как общей, так и эффективной концентрации альбумина позволяет быстро и надежно осуществлять мониторинг степени интоксикации у больных с ХГН по мере трансформации клинико-лабораторных признаков заболевания.Полученные результаты могут быть использованы в практике научных исследований и в учебном процессе, в частности, на курсах повышения квалификации врачейлаборантов и врачей-нефрологов.Основные положения, выносимые на защиту 1. При изучении физико-химических и сорбционных свойств альбумина сывороки крови на примере какого-либо патологического состояния необходимо индивидуально подходить к подбору условий выделения и частичной очистки данного белка с помощью процедуры высаливания. Следует учитывать, что изменение устойчивости альбумина в солевых растворах само по себе является характеристикой нативных свойств альбумина: сохранности гидратной оболочки и суммарного поверхностного электрического заряда.2. У больных ХГН значительно изменены физико-химические свойства альбумина, что проявляется меньшей устойчивостью в растворах сульфата аммония в высоких концентрациях. Этот э ф ф е к т наиболее выражен у больных на этапе обострения (НС) и ХПН, и менее всего - у пациентов в фазе ремиссии и леченых с помощью хронического гемодиализа.3. После выделения и очистки альбумина возрастает молярное отношение содержания восстановленных сульфгидрильных групп к содержанию альбумина крови больных с ХГН, особенно при наличии НС. Это свидетельствует о том, что в ходе процедуры высаливания удается выделить альбумин с частичным нарушением конформации из-за разрыва дисульфидных мостиков, а в осадок попадает альбумин, возможно, перегруженный лигандами, его окисленные и/или димерные формы.4. У альбумина сыворотки крови больных с ХГН сохранена транспортная способность в отношении НЭЖК. У всех пациентов, кроме больных с НС, в этот процесс вовлечен основной центр сорбции с высоким сродством к НЭЖК. У больных с НС задействованы два центра связывания, следовательно, альбумин этих больных имеет повышенную по сравнению с альбумином сыворотки крови других групп пациентов загруженность жирными кислотами.5. В моче больных с ХГН, сочетаю поимся с протеинурией, выявлены модифицированные формы альбумина, относительное содержание которых увеличивается по м е р е нарастания протеинурии, которая может быть механизмом выведения из организма структурно и функционально неполноценных молекул альбумина.Апробация работы Результаты диссертации доложены на з аседаниях проблемной комиссии «Нефрология» и кафедры пропедевтики внутренних болезней Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова, на XXXVI и ХХХУП Конференциях Европейской нефрологической ассоциации и Европейской ассоциации диализа и трансплантации (Мадрид, 1999; Ницца, 2000).По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.
