Главная » 2014 » Сентябрь » 24 » Скачать Кинетика образования комплекса антиген-антитело на микрочипах. Зубцов, Дмитрий Александрович бесплатно
11:48 PM
Скачать Кинетика образования комплекса антиген-антитело на микрочипах. Зубцов, Дмитрий Александрович бесплатно
Кинетика образования комплекса антиген-антитело на микрочипах
Диссертация
Автор: Зубцов, Дмитрий Александрович
Название: Кинетика образования комплекса антиген-антитело на микрочипах
Справка: Зубцов, Дмитрий Александрович. Кинетика образования комплекса антиген-антитело на микрочипах : диссертация кандидата физико-математических наук : 03.00.03 / Зубцов Дмитрий Александрович; [Место защиты: Ин-т молекуляр. биологии им. В.А. Энгельгардта РАН] Москва, 2008 90 c. : 61 08-1/546
Объем: 90 стр.
Информация: Москва, 2008
Содержание:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 Общая характеристика микрочипов
12 Применение белковых микрочипов
13 Изготовление микрочипов
131 Методы иммобилизации белков на микрочипах
1311 Физическая иммобилизация
1312 Химическая иммобилизация
1313 Иммобилизация за счет комплексообразования
1314 Иммобилизация в пористых средах
1315 Иммобилизация белков на трехмерных гидрофильных носителях
132 Методы нанесения молекулярных зондов
1321 Микроконтактный метод
1322 Микроструйный метод
1323 Ближнее электронапыление
1324 Дальнее электронапыление
1325 Микроконтактная печать ;
14 Микрочипы на основе гидрогелей
15 Сравнение двумерных и трехмерных микрочипов
16 Изучение кинетики на гидрогелевых микрочипах
17 Методы ускорения анализа на микрочипах
2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
21 Приборы и реактивы
22 Изготовление микрочипов
24 Определение эффективности иммобилизации
25 Прямой анализ на микрочипах
26 Сэндвич-анализ ПСА на микрочипах
27 Флуоресцентные измерения на чипах
28 Кинетические измерения на микрочипе
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
31 Сравнение эффективности иммобилизации в двух системах
32 Сравнение поверхностных и гидрогелевых микрочипов по уровням сигналов в сэндвич-иммуноанализе
33 Кинетика реакции антиген-антитело на микрочипах
34 Теоретическое описание кинетики связывания антигена из раствора с антителами, иммобилизованными в ячейках микрочипа
341 Кинетика и время насыщения
342 Ускорение транспорта антигена при помощи перистальтического насоса и эффект экранирования
35 Эффект принудительного перемешивания раствора
36 Концентрационные зависимости уровней сигналов и характерных времен
37 Влияние интенсивности перемешивания
38 Перспективность применения перемешивания
ВЫВОДЫ БЛАГОДАРНОСТИ
Введение:
Биологические микрочипы становятся все более востребованным эффективным аналитическим инструментом для фундаментальных и прикладных молекулярно-биологических исследований. Микрочипы содержат упорядоченно размещенные биомолекулярные зонды, которые либо химически прикрепляют к поверхности носителя, такого как стекло, пластик, металл, полимерная мембрана (2Б-микрочип), либо иммобилизуют в объемных гидрогелевых ячейках, закрепленных на носителе (3D-микрочип). Технология изготовления трехмерных гидрогелевых микрочипов с использованием в качестве зондов ДНК-олигонуклеотидов, белков и Сахаров разработана в Институте молекулярной биологии РАН. Трехмерное размещение молекулярных зондов способно обеспечить ряд преимуществ по сравнению с поверхностной иммобилизацией. Для белковых микрочипов особенно важным является устранение контакта иммобилизованной белковой молекулы с гидрофобной поверхностью подложки. Также важно иметь возможность многократного повышения уровней сигналов за счет увеличения количества зонда, приходящегося на единицу площади ячейки.Вместе с тем опасения могла бы внушать ожидаемая медленность кинетики, типичная в случае олигонуклеотидных гелевых микрочипов и обусловленная механизмом «задержанной диффузии» [1]. Однако наше исследование показывает, что в стандартных условиях использования белковых микрочипов кинетика лимитируется «внешней» диффузией в объеме, окружающем ячейку, и потому одинакова для 3D- и 20-микрочипов.Выявленный кинетический механизм делает осмысленной задачу ускорения реакций на белковых микрочипах посредством принудительного перемешивания раствора. Задача ускорения реакции мотивирована не только удобством практического использования метода, но и возможностью значительного повышения разрешающей способности анализа.Целью исследования является изучение кинетики образования комплекса антиген-антитело на гидрогелевых микрочипах, получение данных об основных параметрах, влияющих на время достижения насыщения и на уровни сигналов в насыщении для оптимизации иммуноанализа на микрочипах. Для достижения выбранной цели потребовалось сравнить гидрогелевые микрочипы с поверхностными микрочипами, оценивая основные функциональные параметры: эффективность иммобилизации; уровни сигналов в сэндвич-иммуноанализе (тройной комплекс); время выхода и интенсивности сигналов в насыщении (двойной комплекс). Также изучить кинетику реакции антиген-антитело на гидрогелевых микрочипах и возможность ускорения реакции перемешиванием раствора. Оценить практическую значимость опробованных методов ускорения реакции антиген-антитело на микрочипах.
