Главная » 2014 » Июль » 16 » Скачать Методологические основы совершенствования системы микробиологического контроля качества лекарственных средств. Гунар, Ольга бесплатно
6:40 PM
Скачать Методологические основы совершенствования системы микробиологического контроля качества лекарственных средств. Гунар, Ольга бесплатно
Методологические основы совершенствования системы микробиологического контроля качества лекарственных средств
Диссертация
Автор: Гунар, Ольга Викторовна
Название: Методологические основы совершенствования системы микробиологического контроля качества лекарственных средств
Справка: Гунар, Ольга Викторовна. Методологические основы совершенствования системы микробиологического контроля качества лекарственных средств : диссертация доктора фармацевтических наук : 15.00.02 / Гунар Ольга Викторовна; [Место защиты: ГОУВПО "Пермская государственная фармацевтическая академия"] - Пермь, 2009 - Количество страниц: 287 с. 12 ил. Пермь, 2009 299 c. :
Объем: 299 стр.
Информация: Пермь, 2009
Содержание:
Введение
Глава 1 Контроль качества лекарственных средств — научно-практический раздел фармацевтической микробиологии
11 Микрофлора нестерильных лекарственных средств и различные аспекты ее изучения
12 Необходимость наличия специализированной лаборатории
Глава 2 Материалы^ методы
21 Лекарственные средства
22 Культуры микроорганизмов
23 Питательные среды и реактивы 69 f '
24 Методы исследования
Глава 3 Результаты микробиологического исследования качества JIC
31 Сравнительная характеристика степени микробиологической чистоты различных лекарственных средств
32 Видовой состав микроорганизмов-контаминантов JIC
Глава 4 Методические особенности проведения микробиологических исследований качества JIC
41 Современные подходы к определению антимикробного действия JIC и его нейтрализации "
42 Особености пробоподготовки различных лек форм
Глава 5 Разработка методов выделения и идентификации микроорганизмов-контаминантов JIC
51 Разработка методов количественного определения аэробных бактерий, дрожжевых и плесневых грибов
52 Создание и совершенствование методов выделения и идентификации определенных микроорганизмов
53 Особенности испытания лекарственных растительных средств на микробиологическую чистоту
Глава 6 Состояние и перспективы развития материально-технической базы микробиологических исследований при контроле JIC
Глава 7 Экспериментальное обоснование методики оценки качества отдельных групп JIC и вспомогательных веществ
Глава 8 Пути совершенстования эффективности работы микробиологической лаборатории в сфере лекарственного обращения
81 Особенности функционирования лабораторий микробиологии фармацевтических производств и контрольных служб
82 Прикладное значение микробиологических показателей при оценке рисков получения ложных результатов контроля 234 Обсуждение результатов 244 Выводы- 257 Список литературы 260 Приложения
Введение:
В связи с введением на фармацевтических предприятиях России правил надлежащей производственной практики (GMP) изменяются подходы к контролю качества лекарственных препаратов (ЛП) и субстанций. Необходимость контроля качества нестерильных лекарственных средств (НЛС) обосновывается важностью обеспечения их безопасности и эффективности, т.е. снижения риска при применении потребителем (Акимочкин В.Е., 2003). «Качество должно быть встроено в лекарственный препарат» (Брахт К. 2004, Pharmaceutical» cGMP 2002). Таким образом, начиная с разработки нового фармацевтического продукта, на всем пути от производства до потребителя, необходимо оценивать риск возникновения некачественного продукта и создавать систему управления рисками; добиваясь обеспечения качества НЛС. Особое место при этом занимают биологические методы испытания фармацевтических препаратов, относящиеся в первую очередь к области фармакологии и микробиологии (Попов А.Ю. 2004, Хабриев Р.У.2005).
Особенностью микробиологических видов анализов является специфика объекта исследования - живого микроорганизма, обладающего индивидуальными особенностями. К наиболее значимым объективным факторам, влияющим на результаты анализа, относятся следующие:
• Наличие антимикробного действия самих лекарственных средств (ЛС) или их компонентов, а также присутствие в некоторых из них консервантов, препятствует выявлению микроорганизмов.
• Опережающий рост сопутствующей микрофлоры, затрудняющий количественное или качественное определение отдельных микроорганизмов-контаминантов.
• Возможно обнаружение микроорганизмов в «стрессовом» состоянии под воздействием условий технологического процесса производства НЛС и неравномерное распределение контаминантов в образцах.
Учитывая тесную связь микробиологических показателей с безопасностью применения ЛС, результаты испытаний продукции должны быть максимально точными и надежными.
Основными факторами, влияющими на вариабельность результатов микробиологических исследований, являются: специфичность пробы (физико-химические свойства НЛС и биологические особенности выделяемой популяции микроорганизмов), компетентность персонала и условия его работы, отбор образцов и подготовка пробы, условия- инкубации, характеристики используемых питательных сред. Последние три фактора подлежат обязательной стандартизации (ИСО 13843:2000) и валидации, что подтверждается общей тенденцией по совершенствованию фармакопейных микробиологических методов контроля.
Проблема разработки, обоснования и установления нормативов допустимого содержания микроорганизмов в HJIG тесно связана с выбором методов- их выявления, и идентификации, обуславливающих эффективность анализа: Дальнейшее расширение номенклатуры. ЛП и субстанций, внедрение правил GMP и систем менеджмента качества, как на фармацевтических производствах, так и в контрольных лабораториях требуют стандартных подходов к определению качества НЛС по показателю «Микробиологическая чистота». Поэтому в настоящей работе решается научная проблема, заключающаяся в пересмотре фармакопейных требований к качеству ЛП, совершенствование методов количественного и качественного определения микроорганизмов, подготовки образцов перед испытанием, определения антимикробного действия и методов его нейтрализации. Актуальны вопросы, связанные с функционированием контрольной микробиологической лаборатории в свете современных требований.
С середины 60-х годов 20-го столетия после того, как микроорганизмы были обнаружены- в лекарственных средствах (ЛС), практически во всех развитых странах разносторонне изучались вопросы микробиологической чистоты лекарственных препаратов (ЛП). Клиницистами установлено, что «лекарственная инфекция», связанная с контаминацией препаратов бактериями и грибами, достаточно опасна, особенно для новорожденных, ослабленных пациентов, для больных пожилого возраста, с хроническими заболеваниями и после применения средств современной терапии. В конце прошлого века появилось много публикаций о микроорганизмах, контаминирующих JIC (Имшенецкий A.JI. и др., 1984, Flaum I., 1978). Клинические данные об ухудшении здоровья пациентов после приема ряда препаратов получили объяснение в работах микробиологов, обнаруживших в них бактерии и грибы (Railings L.O., 1966, Savin J.А., 1967). Среди описанных случаев лекарственной инфекции выделяется заражение грибами новорожденных в одном из роддомов Японии, приведшее к летальному исходу в результате использования контаминированной детской присыпки (Курата X. и др., 1980). Имеются описания кожных заболеваний, вызванных применением медицинского крема, загрязненного патогенным дрожжеподобным грибом С.albicans и синегнойной палочкой P. aeruginosa (Bruck К.А., 1971). В' клинической микробиологии уделялось большое внимание микрофлоре глазных контактных линз,и растворов1 для их промывания (Butrus S., 1986, Pitsigavdaki Е, 1990). Были доказаны мутагенные, тератогенные и канцерогенные свойства метаболитов плесневых грибов (Тутельян 1981, Тутельян 1985, Волгарев 1985, Дурнев 1999, Столярова 2002).
В связи с актуальностью проблемы микробной загрязненности НДС в 1972 г. были опубликованы рекомендации Всемирной Организации Здравоохранения и Международной Федерации Фармацевтов, содержащие общие принципы к установлению норм, лимитирующих допустимый уровень количественного и качественного состава микрофлоры в лекарственных средствах.
Во второй половине 20-го века допустимые пределы микробиологической чистоты JIC и методы количественного и качественного определения микроорганизмов были разработаны и вошли в официальные нормативные документы, в первую очередь в фармакопеи (ЕР 2005, British Р. 2003 USP 2006, JP XIY 2001, P. of China 2000).
Сравнительный анализ структуры ведущих фармакопей и действующего издания отечественной фармакопеи показал, что по своей направленности существующая в Государственной Фармакопее СССР XI изд. общая фармакопейная статья аналогична монографиям Европейской, Американской и Японской фармакопей. Вышесказанное иллюстрировано таблицей 1.
Таблица 1
Данные ведущих фармакопей по микробиологическим показателям качества лекарственных средств
Монографии Европейская Фармакопея ГФ XI изд. Японская фармакопея 5 изд. США 31 изд. фарм. XIV
Испытание на 2.6.1 с.187-192 8.р.1312стерильность 1316
Методы 2.6.12 (Общее с. 193-209 35. микробиологи- коли-чество р.58-64 ческого контроля жизнеспособных нестерильных микроорганизмов) лекарственных 2.6.13 средств (Определение отдельных видов микроорганизмов) •
Микробиологи- 5.1.4 (нормы Измене- 7. ческое качество допустимой ние №3 р.1310фарм. препаратов микробной 1312 допустимые загрязненности) пределы)
Сравнение материалов, указанных в представленных статьях, показывает, что содержание статей требует гармонизации, например: введение преинкубации испытуемых образцов для восстановления жизнедеятельности контаминантов, включение метода наиболее вероятных чисел, использование в испытаниях питательных сред с более воспроизводимыми ростовыми свойствами (без применения мясной воды) и др. Мировой опыт показывает реальность попадания в JIC микроорганизмов, работа в контрольной службе подтверждает это положение.
Введение в отечественную Государственную Фармакопею (ГФ XI изд., 1990г.) испытания, лекарственных средств на стерильность и микробиологическую чистоту открыло перспективу для развития нового направления в микробиологии — фармацевтической микробиологии: Однако возможности улучшения микробиологического контроля? качества JIC сдерживались рядом объективных трудностей: в учебных программах, профильных вузов отсутствовали целевые разделы фармацевтической микробиологии, постдипломная профессиональная подготовка и усовершенствование-специалистов проводилась в рамках Государственного образовательного стандарта по специальности «бактериология»- для сотрудников, окончивших только медицинские ВУЗы, не было; должной гармонизации с базовыми материалами: и положениями Европейской Фармакопеи5 в отношении классификации, лекарственных средств с учетом их происхождения и, способа применения, не было системного и в равной степени универсального алгоритма микробиологического контроля различных категорий лекарственных препаратов, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ. отсутствовали адаптированные к целям исследования методики и схемы определения качества лекарственных растительных средств по показателю «Микробиологическая чистота», немногочисленные отечественные публикации оставались разрозненными и монопрофильными по информации. Представленные в них результаты в силу различного методического подхода и лабораторного оснащения авторов были часто несопоставимы, без должной; научно-практической оценки оставался видовой состав грибов-контаминантов лекарственных средств.
Таким образом, возникла необходимость комплексного решения на современном уровне (с учетом требований GMP и GLP) организационнометодических, теоретических и практических вопросов, связанных с микробиологическим анализом качества лекарственных средств. Это в свою очередь должно обеспечить существенное повышение эффективности системы Государственного контроля- качества лекарственных средств по микробиологическим показателям.
Анализ и перечень приведенных выше положений определяет актуальность проблемы и практическую значимость темы настоящей работы.
Цель, работы. Целью настоящего исследования является формирование теоретических основ и разработка современных методологических подходов к микробиологическому контролю качества JIC, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ с учетом положений GMP' и GLP в Российской Федерации.
Задачи исследования:
1. Изучить качество ряда ЛП; в том числе не контролируемых ранее растительных ЛС, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ по ведущему показателю безопасности — «Микробиологическая чистота».
2. Определить состав основной микрофлоры, содержащейся в различных лекарственных формах, и идентифицировать выделенные грибы.
3. Гармонизировать с Европейской Фармакопеей нормы допустимой микробной загрязненности ЛП; разработать требования к качеству ЛРС, субстанций и вспомогательных веществ по показателю «Микробиологическая чистота».
4. Усовершенствовать методы определения антимикробного действия ЛС и изучить антимикробное действие ЛС различных лекарственных форм и фармакотерапевтических групп.
5. Обосновать и внедрить в практику микробиологических исследований при контроле качества ЛС высокоэффективные методы количественного определения микроорганизмов, а также способы выделения и идентификации отдельных видов бактерий-контаминантов ЛС.
6. Сравнить базовые характеристики питательных сред отечественного- и импортного производства, используемых для контроля качества ЛС; обосновать рецептуры и изучить качество соево-казеинового агара, агара с бриллиантовым зеленым и среды типа агара Мак-Конки.
7. Создать систему микробиологического контроля качества (СМКК) ЛС, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ, выработать концепцию рационального построения и функционирования, определить ее структуру.
Научная новизна. Создана система микробиологического контроля качества (СМКК) ЛС, определена ее структура и концепция рационального построения и функционирования. Выполнен дифференцированный подход к установлению предельных норм допустимой микробной загрязненности ЛС, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ. Осуществлена классификация препаратов, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ по категориям с учетом происхождения, и способа применения. Определены пути повышения информативности микробиологических исследований при контроле качества ЛС.
Установлены особенности исследования микробиологической чистоты ЛРС в соответствии с их физико-химическими, биологическими свойствами, назначением и нормами микробной загрязненности для каждой категории растительных препаратов.
Выявлено антимикробное действие у ряда ЛС из различных фармакотерапевтических групп: нейротропные, антидепрессанты, седативные, антигистаминные, спазмолитические, гипотензивные, сосудорасширяющие, не наркотические противовоспалительные, болеутоляющие и жаропонижающие ЛС.
Впервые1 проведена углубленная микологическая экспертиза грибов-контаминантов ЛС, при этом выявлена их обсемененность 74 видами грибов из 16 родов, в 28,9% изученных серий ЛС содержание грибов превышало допустимые нормы.
Теоретическая и практическая значимость работы. Разработанные, усовершенствованные и внедренные в процессе выполнения работы алгоритм, этапы, схемы и методы микробиологических исследований позволили стандартизовать условия испытаний и обеспечить повышение эффективности контроля качества JIC на фармацевтических предприятиях России и в контрольной службе.
Предложен современный методологический подход к микробиологическому анализу качества JIC, основанный на использовании комплекса стандартных методов, позволяющих: достоверно установить количество аэробных бактерий, дрожжевых и плесневых грибов, выделить из JIC и идентифицировать отдельные виды нормируемых микроорганизмов;
Разработан эффективный и экономичный чашечный агаровый метод (модифицированный глубинный) количественного определения в JIC аэробных бактерий, дрожжевых и плесневых грибов. Валидация предложенного' метода позволила рекомендовать его использование наравне с двухслойным, поверхностным и глубинным методами для* получения достоверных, воспроизводимых количественных результатов контроля качества JIC. Предложены методы количественного и качественного определения микроорганизмов-контаминантов различных лекарственных форм медицинских препаратов с учетом подготовки образцов перед анализом (материалы исследований внедрены в ОФС 42-0067-07 ГФ XII изд.).
Усовершенствованы методы определения антимикробного действия различных JIC, включая разработку альтернативного метода репликаций для водонерастворимых и окрашенных ЛП. Детализированы подходы к нейтрализации антимикробного действия (материалы внедрены в Изменении №2 к Государственной Фармакопее XI изд. от 14.08.01 и в ГФ РФ XII изд.).
Данные сравнительного изучения ряда сухих питательных сред для контроля микробной загрязненности ЛС различных отечественных производителей свидетельствуют о возможности их использования наравне с импортными сухими и готовыми к употреблению- питательными средами (материалы включены в ОФС 42-0067-07 ГФ РФ XII изд.).
На основании проведенных исследований разработаны и утверждены Изменения №1, №2, №3 к ГФ XI изд., ВФС 42-3455-99 «Определение ростовых свойств питательных сред, используемых для испытания на стерильность, и микробиологическую чистоту лекарственных средств»; ВФС 42-3454-99 «Метод наиболее вероятных чисел»; ОФС 42-0016-04 «Методы микробиологического контроля лекарственных растительных средств, состоящих из одного вида сырья или нескольких (сборы)- фасованная продукция, а также растительного сырья «ангро»»; ОФС 42-0066-07 «Стерильность»; ОФС 42-0067-07 «Микробиологическая.чистота»; ОФС 42-0069-07 «Определение эффективности антимикробных консервантов JIC» ГФ РФ XII изд.
Методы микробиологического^ контроля качества JIC апробированы и внедрены на фармацевтических предприятиях: ОАО «Красногорсклексредства» (акт о внедрении от 26.12.2006), ООО «Бион» (акт о внедрении исх. №458 от 31.10.2006), ЗАО «ФПК ФармВИЛАР» (акт о внедрении исх. №28 от 31.01.07), ОАО «АЗТ Фарма К.Б.»(акт о внедрении исх.№288 от 15 сентября?006г).
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в микробиологических лабораториях ИСКЛС ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора в рамках отраслевой научно-исследовательской программы НЦ ЭГКЛС «Экспертиза и Государственный контроль лекарственных средств», утвержденной 8 декабря 2000 г. начальником Управления научно-исследовательских медицинских учреждений МЗ РФ Ткаченко С.Б. и в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Пермская государственная академия» (номер государственной регистрации 01.9.50007417).
Положения, выносимые на защиту:
1. Методологический подход к исследованию качества ЛП, растительных лекарственных средств, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ по ведущему показателю безопасности - «Микробиологическая чистота».
2. Разработка норм и методов определения микробиологической чистоты JIPC, позволяющие объективно оценить их качество.
3. Микологическая экспертиза при микробиологическом анализе JIC.
4. Определение антимикробного действия JIC - необходимый этап исследований для снижения риска ложных результатов микробиологических исследований фармацевтических препаратов и субстанций.
5. Разработка эффективного и экономичного метода количественного определения микроорганизмов-контаминантов JIC.
6. Экспериментальное обоснование базовых характеристик питательных сред импортного и отечественного производства для контроля загрязненности JIC.
7. Концептуальная модель СМКК JIC в сферах регистрации, производства и контроля качества JIC.
